СРАВНИТЕЛЬНАЯ КИНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТИАМИНКИНАЗ ИЗ ПИВНЫХ ДРОЖЖЕЙ И ГОЛОВНОГО МОЗГА СВИНЬИ
Аннотация
Методами ацетонового и аммонийного фракционирований, ионообменной хроматографии на ДЕАЕ-тойоперле 650М, гель-фильтрации на сефадексе G-100 и аффинной хроматографии на голубой сефарозе из мозга свиньи выделена электрофоретически гомогенная тиаминкиназа с суммарным выходом 15% и степенью очистки 2240 раз. По физико-химическим и кинетическим параметрам мембранно-ассоциированная тиаминкиназа из мозга существенно не отличается от одноимённого цитозольного белка из пивных дрожжей: имеет оптимум рН 8,6, молекулярную массу 52,8 ±1,2 кДа, металл-зависима и состоит из двух идентичных субъединиц. KS для свободных ионов магния и Km для тиамина и комплекса Mg · АТФ2- соответствует внутриклеточному содержанию их в мозге. Исходя из свойств тиаминовых ферментов, высказано предположение, что тиаминкиназа животных и микроорганизмов выполняет роль буферной системы, препятствующей немедленным изменениям концентраций активных форм витамина и обеспечивающей постоянство скорости сопряжённых реакций, использующих исходный общий кофактор – тиаминдифосфат.
Литература
Воскобоев, А.И. Биосинтез, деградация и транспорт фосфорных эфиров тиамина / А.И. Воскобоев, И.П. Черникевич. – Минск.: Наука и техника, 1987. – 200 с.
Макарчиков, А.Ф. Тиаминтрифосфат и ферменты его гидролиза в биохимических объектах.: автореф. дис…докт. биол. наук: 03.00.04 / А.Ф. Макарчиков. – Минск – 2008. – 43 с.
Макарчиков, А.Ф. Тиаминтрифосфат: новый взгляд на некоферментную функцию витамина В1 /А.Ф. Макарчиков. – Минск:
Белорусская наука, 2008. – 433 с.
Остерман, Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие) / Л.А. Остерман. – М.: Высшая школа, 1981. – 286 с.
Черникевич, И.П. Ферментные системы биотрансформации активных форм витамина В1 (структура, свойства, регуляция). : автореф. дис. … докт. хим. наук: 03.00.04 / И.П. Чернике- вич. – Минск. – 1996. – 35 с.
Черникевич, И.П. Влияние субстратов, кофакторов и эффекторов на структуру и динамику тиаминкиназы из пивных дрожжей./ И.П. Черникевич, А.А. Маскевич, Г.А. Гачко // Биоорганическая химия. – 1992. – Т.18, N 4. – C.509-530.
Deus, B. Subcellular distribution of thiamine pyrophosphakinase activity in rat liver and erythrocytes. / B. Deus, H. Blum // Biachim.
Biaphys. Acta. – 1970. – V. 219. – P. 489 – 497.
Haas, R.H. Thiamin and the brain. / R.H. Haas // Ann. Rev. Nutr. – 1988. – V.8. – P.483-515.
Kaziro, Y. Studies on thiaminokinase from baker’s yeast. I. purification and properties. / Y. Kaziro // J. Biochem. – 1959. – V. 46, № 11. – P. 1523-1539.
Mano, Y. Studies on enzymatic synthesis of cocarboxylase in animal tissue. III. Purification and properties of thiaminekinase from rat liver. / Y.Mano // J.Biochem. – 1960. – V. 47, № 2. – P. 283 – 290.
Mitsuda, H. Pyrification and properties of thiamine pyrophosphokinase from parsley leaf. / H. Mitsuda, Y.Takii, K. Ivami // J.Biochem. – 1980. – V.88, № 1. – P.223-230.
Sanemori, H. Reversed-Phase High – Performance Liquid chromatography Analysis of Thiamine Phosphate Esters in Paracoccus denitrificans. / H. Sanemori, H. Ueki, T. Kawasaki // Anal. Biochem. – 1980. – V. 107. – P. 451-455.
