ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ЗНАЧИМОСТЬ СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ ГРУПП ТИАМИНКИНАЗЫ ГОЛОВНОГО МОЗГА СВИНЬИ
Аннотация
Исследована функциональная значимость сульфгидрильных групп тиаминкиназы, выделенной из головного мозга свиньи. При использовании реагента Эллмана показано, что в реакцию окисления на димер нативного фермента вступают две сульфгидрильные группы. Модификация первой быстро реагирующей SH-группы приводит к полному, но частично обратимому торможению активности фермента. Mg2+, Mg – АТР2– в некоторой степени препятствует инактивации. По-видимому, защита функциональных групп при помощи субстратов носит опосредованный через пространственную стабилизацию характер, поскольку число титруемых реагентом SH-групп до и после взаимодействия фермента с лигандами остаётся неизменным. Замена нитротиобензоата на цианид-ион при использовании фермента с небольшой степенью модификации приводит к регенерации лишь 7-10% активности. Предполагается, что блокирование высоко реакционной сульфгидрильной группы сопровождается глубокими изменениями в структуре белка. Эта группа не принимает прямого участия в катализе, а выполняет структурную функцию. Показано отсутствие дисульфидных связей в молекуле тиаминкиназы.
Литература
Воскобоев, А. И. Биосинтез, деградация и транспорт фосфорных эфиров тиамина / А. И. Воскобоев, И. П. Черникевич. – Мн. : Наука и техника, 1987. – 200 с.
Дарбре, А. Практическая химия белка / А. Дарбре. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 621 с.
Островский, Ю. М. Активные центры и группировки в молекуле тиамина / Ю. М. Островский. – Мн. : Наука и техника, 1975. – 423 с.
Торчинский, Ю. М. Сера в белках / Ю. М. Торчинский. – М. : Наука, 1977. – 229 с.
Черникевич, И. П. Ферментные системы биотрансформации активных форм витамина В1 (структура, свойства, регуляция): автореф. дис. … докт. хим. наук: 03.00.04 / И. П. Черникевич; Минск. ин-т биоорганической химии. – Минск, 1996. – 32 с.
Черникевич, И. П. Сравнительный кинетический анализ тиаминкиназ из пивных дрожжей и головного мозга свиньи / И. П. Черникевич // Журнал ГрГМУ. – 2011. - № 3. – С. 25-28.
Butterworth, P. H. A modification of Ellman procedure for the estimation of protein sulfhydryl groups / P. H. Butterworth, H. Baum, J. W. Poster // Arch. Biochem and Biophys. – 1987. – Vol.118, N 3. – P. 716 -723.
Cavallini, D. Determination of disulfide groups in proteins / D. Cavallini, M. T. Graziani, S. Dupre // Nature. – 1966. – Vol. 212, N 5059. – P. 294-295.
Ellman, G. L. Tissue sulfhydryl groups / G. L. Ellman // Arch. Biochem. and Biophys. – 1959. – Vol. 82, N 1. – P. 70-77.
Hamada, M. Purification and properties of thiamine pyrophosphokinase from pig heart / M. Hamada // Seikigaku. – 1970. Vol. 41. – P. 310-324.
Kaziro, Y. Quantitative determination of thiamine pyrophosphate using apocarboxylase and alcohol dehydrogenase / Y. Kaziro // J. Biochem. – 1957. – Vol.44, N 7. – P. 827-838.
Mitsuda, H. Purification and properties of thiamine pyrophosphokinase from parsley leaf / H. Mitsuda, Y. Takii, K. Iwami // J. Nutr. Sci. Vitaminal. – 1975. – Vol. 21, N 2. – P. 103-115.
Thame-Beau, F. ATP : Thiamine pyrophosphotransferase. Purification et etude du mechanisme du reaction / F. Thome-Beau, T. Lan, A. Olomuski // Biochim. Biophys. Acta. – 1989. – Vol. 182, N 1. – P. 111-121.
Wakabayshi, Y. Some properties of the purified thiamine pyrophosphokinase from pig brain / Y. Wakabayshi // Vitamins. – 1998. – Vol. 52, N 5-6. – P. 229-236.
