СПЕКТРАЛЬНО-КИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРЫ И ДИНАМИКИ ТИАМИНКИНАЗЫ ГОЛОВНОГО МОЗГА СВИНЬИ
Аннотация
С использованием стационарной флуориметрии изучено влияние субстратов (тиамин, Mg⋅АТР), кофакторов (Mg2+, Mn2+, Ca2+) и эффекторов (фосфорные эфиры тиамина, пируват, фосфоенолпируват, этиловый эфир пирувата) на структуру и динамику тиаминкиназы (КФ 2.7.6.2) головного мозга свиньи. Показано, что связывание лигандов с тиаминкиназой сопровождается заметным тушением её триптофановой флуоресценции. Анализ полученных результатов позволил установить, что тиамин и АТР связываются, соответственно, пиримидиновым и адениновым циклами в гидрофобной области молекулы фермента. Пируват имеет два центра связывания: ингибирующий (относительно гидрофобный) и активирующий (гидрофильный). Последний находится в непосредственной близости с центром связывания тиамина и обеспечивает взаимодействие карбонильной группы пирувата с субстратом. Ионы двухвалентных металлов увеличивают сродство субстратов и эффекторов к белку, способствуя одновременно повышению гидрофобности его активного центра.
Литература
Виноградов, В. В. Механизм активации тиа- минпирофосфокиназы печени крыс ионами магния / В. В. Виноградов, С. А. Струмило // Биохимия. – 1979. – Т. 44, № 1. – С. 50-56.
Воскобоев, А. И. Биосинтез, деградация и транс- порт фосфорных эфиров тиамина // А. И. Воскобоев, И. П. Черникевич. – Минск.: Наука и техника, 1987. – 200 с.
Грин, Д. Молекулярные аспекты жизни / Д. Грин, Р. Гольдбергенр. – М. : Мир, 1968. – 310 с.
Керридж, Д. Биохимическая логика / Д. Керридж, К. Типтон. – М. : Мир, 1974. – 328 с.
Кочетов, Г. А. Тиаминовые ферменты / Г. А. Кочетов. – М. : Наука, 1978. – 234 с.
Лакович, Дж. Основы флуоресцентной спектроско- пии / Дж. Лакович. – Мир, 1986. – 496 с.
Макарчиков, А. Ф. Тиаминтрифосфат: новый взгляд на некоферментную функцию витамина В1 / А. Ф. Макарчиков. – Минск : Белорусская наука, 2008. – 433 с.
Маскевич, А. А. Флуоресцентные исследования внутримолекулярной подвижности тиаминкиназы из пивных дрожжей /А. А. Маскевич, И. П. Черникевич, С. А. Маскевич, Л. Н. Кивач // Журнал физ. химии. – 1990. – Т. 64, 3 8. – С. 2162-2168.
Полторак, О.М. Физико-кинетические основы фер- ментативного катализа / О. М. Полторак, Е. С. Чухрай – М. : Высшая школа, 1971. – 311 с.
Черникевич, И. П. Ферментные системы биотранс- формации активных форм витамина В1 (структура, свой- ства, регуляция): автореф. дис. … докт. хим. наук: 03.00.04 / И. П. Черникевич, Минск. ин-т биоорганической химии. – Минск, 1996. – 32 с.
Черникевич, И. П. Сравнительный кинетический анализ тиаминкиназ из пивных дрожжей и головного мозга свиньи / И. П. Черникевич // Журнал ГрГМУ. – 2011. - № 3. – С. 25-28.
Farzami, B. Solvents effects on thiamine-enzyme model interactions / I. Interactions with tryptophane / B. Farzami, P. H. Mariam, F. Jordon // Biochemistry. – 1977. – V.16, N 6. – P. 1105 – 1110.
Haas, R. H. Thiamin and the brain / R. H. Haas // Ann. Rev. Nutr. – 1988. - V. 8. – Р. 483–515.
Monod, I. on the nature of allosteric transitions: a plausible model / I. Monod, I. Wyman, I. P. Changeux // I. Mol. Biol. – 1965. – V. 12, N1. – P. 88-102.
