РОЛЬ СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ ГРУПП В ПРОЯВЛЕНИИ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ТИАМИНКИНАЗЫ ГОЛОВНОГО МОЗГА СВИНЬИ
Аннотация
С использованием меркаптидобразующих реагентов, HgCl2 и n-хлормеркурибензоата, определено количество и реакционная способность SH-групп тиаминкиназы головного мозга свиньи. Показано, что молекула фермента содержит два типа сульфгидрильных групп: одну легкодоступную, быстро взаимодействующую и вторую – частично скрытую, «вяло» реагирующую. Модификация n-хлормеркурибензоатом SH-группы первого типа приводит к 36% снижению скорости ферментативной реакции, второго – к полной инактивации тиаминкиназы. Из-за разной химической природы меркаптидобразующие реагенты различаются эффективностью блокирующего действия. Если n-хлормеркурибензоат в эквивалентных с белком соотношениях формирует одну химическую связь: белок –S – HgR, – то HgCl2, вероятно, две. Субстрат – тиамин, но не АТР, а ионы магния лишь частично защищают тиаминкиназу от инактивирующего действия n-хлормеркурибензоата. Можно полагать, что SH-группы не принимают прямого участия в процессе биотрансформации витамина В1, а локализованы в участках сорбции активного центра белка, стабилизируя его структуру.Литература
Воскобоев, А. И. Четертичная структура и аллостерические свойства тиаминпирофосфокиназы из печени крыс / А. И. Воскобоев, И. М. Арцукевич, Ю. М. Островский // Биохимия. – 1976. – Т. 41,№12. – С. 2196-2201.
Воскобоев, А. И. Идентификация функциональных групп дрожжевой тиаминпирофосфокиназы / А. И. Воскобоев, В. П. Гриневич // Биохимия. – 1978. – Т. 43, №10. – С.1743-1748.
Дарбре, А. Практическая химия белка / А. Дарбре. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 612с.
Торчинский, Ю. М. Сера в белках / Ю. М. Торчинский. – М. : Наука, 1977. – 229с.
Черникевич, И. П. Сравнительный кинетический анализ тиаминкиназ из пивных дрожжей и головного мозга свиньи / И. П.Черникевич // Журнал ГрГМУ. – 2011. – № 3. – С.25-28.
Черникевич, И. П. Функциональная значимость сульфгидрильных групп тиаминкиназы головного мозга свиньи / И. П.Черникевич // Журнал ГрГМУ. – 2013. – № 4. – С. 25-28.
Boyer, P. D.Enzymes / P. D. Boyer. – NewYork.: Academic Press, 1971. – Vol. 3.
Hamada, M. Purification and properties of thiamine pyophosphokinase from pig hear / M.Hamada // Seikigaku. – 1970. – Vol. 41. – P. 310-324.
Kaziro, Y. Quantitative determination of thiamine pyrophosphate using apocarbaxylase and alcohol dehydrogenase / Y. Kaziro // J.Biochem. – 1957. – Vol. 44, N 7. – P. 827-838.
Mitsuda, H. Purification and properties of thiamine pyrophosphokinase from parsley leaf / H. Mitsuda, Y. Takii, K. Iwawi // J. Nutr. Sci. Vitaminol. – 1975. – Vol. 21, N 2. – P. 103-115.
Thome-Bean, F. ATP: Thiamine pyrophoshotransferase. Purification et etude du mechanismedu reaction / F. Thome- Bean, T. Lan, A. Olomuski // Biochim. Biophys. Acta. – 1989. – Vol. 182, N1. – P. 111-121.
Wakabayashi, Y. Some properties of the purified thiamine pyrofosphokinase from pig brain / Y. Wakabayashi // Vitamins. – 1998. – Vol. 52, N 5-6. – P. 229-236.
