ВЫДЕЛЕНИЕ И РАДИОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АТР: ТИАМИНДИФОСФАТФОСФОТРАНСФЕРАЗЫ ИЗ МИТОХОНДРИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА СВИНЬИ



DOI: http://dx.doi.org/10.25298/2221-8785-2017-15-4-442-446


И. П. Черникевич (I. P. Chernikevich), Е. Н. Хильманович (E. N. Khilmanovich), Е. В. Кравец (E. V. Kravec)

Аннотация


Введение. Назначение и биологические пути регуляции уровня трифосфорного эфира тиамина в клетке остаются невыясненными. Связано это с отсутствием надёжной методологической основы оценки активности фермента биосинтеза метаболита – АТР: тиаминдифосфатфосфотрансферазы (КФ 2.7.4.15).
Цель. Разработать адекватный способ разделения ингредиентов трансферазной реакции, выделить частично очищенный препарат фермента.
Материал и методы. В качестве субстрата использовался экзогенный, полученный нами, 14С – тиаминдифосфат. Образовавшийся продукт – трифосфорный эфир тиамина – отделяли ионообменной хроматографией.
Результаты. Из митохондриальной фракции головного мозга свиньи выделен частично очищенный препарат трансферазы с выходом 14,2%. Установлено, что максимальная ферментативная активность проявляется при pH 7,0-8,5, концентрациях тиаминдифосфата 2,5 – 3,0∙10-5 М.
Выводы. Предложенный изотопный метод обладает достаточной чувствительностью и позволяет фиксировать АТР: тиаминдифосфатфосфо-трансферазную активность в субклеточных фракциях мозга.

Ключевые слова


АТР: тиаминдифосфатфосфотрансфераза; мозг свиньи; радиометрический метод; свойства фермента.

Полный текст:

Литература


Макарчиков, А. Ф. Тиаминтрифосфат: новый взгляд на некоферментную функцию витамина В1 / А. Ф. Макарчиков. – Минск : Белорусская наука, 2008. – 443 с.

Makarchikov AF. Tiamintrifosfat: novyj vzgljad na nekofermentnuju funkciju vitamina B1 [Thiaminetriphosphate: a new view on uncoenzyme function of vitamin B1]. Мinsk: Belorusskaja nauka; 2008. 443 p.

Пархоменко, Ю. М. Нейроактивность тиамина: факты и гипотезы / Ю. М. Пархоменко, Г. В. Донченко, З. С. Протасова // Украинский биохимический журнал. – 1996. – Т. 68, № 2. – С. 3-14.

Parhomenko YuM, Donchenko GV, Protasova ZS. Nejroaktivnost tiamina: fakty i gipotezy [Neuroactivity of Tiaminum: facts and hypothesis]. Ukrainskij biohimicheskij zhurnal [The Ukrainian Biochemical Journal]. 1996;68(2):3-14.

Bettendorff, L. Thiamine derivatives in excitable tissues: metabolism, deficiency and neurodegenerative diseases / L. Bettendorff, P. Wins // Recent Res. Devel. Neurochem. – 1999. – Vol. 2, part 1. – P. 37-62.

Bettendorff L, Wins P. Thiamine derivatives in excitable tissues: metabolism, deficiency and neurodegenerative diseases. Recent Res. Devel. Neurochem. 1999;2(1):37- 62.

Itokawa, Y. Thiamine and nervous system function: an historical sketch / Y. Itokawa // Metab. Brain. Dis. – 1996. – Vol. 11, № 1. – P. 1-7.

Itokawa Y. Thiamine and nervous system function: an historical sketch. Metab. Brain. Dis. 1996;11(1):1-7.

Itokawa, Y. The enzymatic synthesis of triphosphothiamin / Y. Itokawa, J. R. Cooper // Biochim. Biophys. Acta. – 1968. – Vol. 158, № 1. – P.180-182.

Itokawa Y, Cooper JR. The enzymatic synthesis of triphosphothiamin. Biochim. Biophys. Acta. 1968;158(1):180-182.

Murphy, J. V. Leigh’s disease: biochemical characteristics of the inhibitor / J. V. Murphy, L. J. Craig, R. H. Glew // Arch. Neurol. – 1974. – Vol. 31, № 4. – P. 220-227. – doi: 10.1001/archneur.1974.00490400034002.

Murphy JV, Craig LJ, Glew RH. Leigh’s disease: biochemical characteristics of the inhibitor. Arch. Neurol. 1974;31(4):220-227. doi: 10.1001/archneur. 1974.00490400034002.

Eckert, T. Über eine ATP: Thiamindiphosphat- Phosphotransferasa-Aktivität im Nervengewebe Ein Beitrag zum Mechanismus der nervösen Reizleitung / T. Eckert, W. Möbus // Hoppe Seylers Z. Physiol. Chem. – 1964. – Vol. 338, № 1-2. – P. 286-288. – doi: 10.1515/bchm2.1964.338.1-2.286.

Eckert T, Möbus W. Über eine ATP: Thiamindiphosphat- Phosphotransferasa-Aktivität im Nervengewebe Ein Beitrag zum Mechanismus der nervösen Reizleitung. Hoppe Seylers Z. Physiol. Chem. 1964;338(1-2):286-288. doi: 10.1515/bchm2.1964.338.1-2.286.

Ruenwongsa, P. The role of bound thiamine pyrophosphate in the synthesis of thiamine triphosphate in rat liver / P. Ruenwongsa, J. R. Cooper // Biochym. Biophys. Acta. – 1977. – Vol. 482, № 1. – P. 64-74.

Ruenwongsa P, Cooper JR. The role of bound thiamine pyrophosphate in the synthesis of thiamine triphosphate in rat liver. Biochym. Biophys. Acta. 1977;482(1):64-74.

Voskoboyev, A. I. Studies on thiamine diphosphate kinase (EC 2.7.4.15) from brewer’s yeast: purification and some properties / A. I. Voskoboyev, I. P. Chernikevich, V. S. Luchko // Biomed. Biochim. Acta. – 1987. – Vol. 46, № 1. – P. 3-13.

Voskoboyev AI, Chernikevich IP, Luchko VS. Studies on thiamine diphosphate kinase (EC 2.7.4.15) from brewer’s yeast: purification and some properties. Biomed. Biochim. Acta. 1987;46(1):3-13.

Hashitani, Y. The partial purification of thiamine triphosphatase from rat brain / Y. Hashitani, J. R. Cooper // J. Biol. Chem. – 1972. – Vol. 247, № 7. – P. 2117-2119.

Hashitani Y, Cooper JR. The partial purification of thiamine triphosphatase from rat brain. J. Biol. Chem. 1972;247(7):2117-2119.

Makarchikov, A. F. Purification and characterization of thiamine triphosphatase from bovine brain / A. F. Makarchikov, I. P. Chernikevich // Biochim. Biophys. Acta. – 1992. – Vol. 1117, № 3. – P. 326-332. – doi: 10.1016/0304-4165(92)90032-P.

Makarchikov AF, Chernikevich IP. Purification and characterization of thiamine triphosphatase from bovine brain. Biochim. Biophys. Acta. 1992;1117(3):1326-1332. doi: 10.1016/0304-4165(92)90032-P.

Content of thiamin phosphate esters in mammalian tissues – an extremely high concentration of thiamin triphosphate in pig skeletal muscle / Y. Egi [et al.] // Biochem. Int. – 1986. – Vol. 12, № 3. – P. 385-390.

Egi Y, Koyama S, Shikata H, Yamada K, Kawasaki T. Content of thiamin phosphate esters in mammalian tissues – an extremely high concentration of thiamin triphosphate in pig skeletal muscle. Biochem. Int. 1986;12(3):385-390.

Nishimune, T. Hydrolysis and synthesis of thiamine triphosphate in bacteria / T. Nishimune, R. Hayashi // J. Nutr. Sci. Vitaminol. – 1987. – Vol. 33, № 2. –P. 113-127.

Nishimune T, Hayashi R. Hydrolysis and synthesis of thiamine triphosphate in bacteria. J. Nutr. Sci. Vitaminol. 1987;33(2):113-127.


Ссылки

  • На текущий момент ссылки отсутствуют.